Overview

Przedstawiony material dotyczy klonowania promotora i identyfikacji in silico elementów cis-aktywnych zlokalizowanych w genie syntazy difosforanu kopalilu (CPS) Salvia miltiorrhiza. Roślina ta jest interesująca z medycznego punktu widzenia ze względu na znaczną aktywnośc biologiczną, zależną od związków terpenoidowych znanych jako tanshinony. Ponieważ szlaki metaboliczne biosyntezy tanshinonów nie są w pelni poznane, postanowiliśmy rozszyfrowac nieznany aspekt regulacji transkrypcji CPS, enzymu o kluczowym znaczeniu dla biosyntezy tanshinonów. Zidentyfikowaliśmy liczne motywy cis-aktywne wraz z homologicznymi czynnikami trans-aktywnymi potencjalnie aktywnymi w regulacji genu CPS S. miltiorrhiza. Analiza genów czynników trans wspólekspresjonowanych z CPS A. thaliana i ich porównanie z czynnikami trans zidentyfikowanymi w badaniach in silico promotora CPS S. miltiorrhiza nie wykazala żadnych wspólnych bialek. Aby eksperymentalnie zweryfikowac wyniki wyszukiwań in silico, oceniono wplyw auksyny, gibereliny, kwasu salicylowego i wysokiego stężenia soli na aktywnośc promotora: ekspresję genu gus mierzono 0, 12, 24, 48, 72 i 96 godzin po podaniu hormonów lub podczas 96-godzinnej ekspozycji na 100 mM NaCl.