Overview

A integração aleatória do vetor IVET no cromossoma do agente patogénico é realizada por mutagénese de inserção-duplicação para criar um conjunto de agentes patogénicos recombinantes (o que significa que o gene no qual o vetor foi inserido por recombinação homóloga não é interrompido). Os recombinantes podem ser seleccionados utilizando a resistência aos antibióticos, uma vez que um marcador adicional se encontra também na construção IVET integrada. Os clones agrupados são então inoculados no ratinho. Os dois principais tipos de estratégias de armadilha do promotor IVET são (a) a complementação da mutação auxotrófica e (b) a expressão da resistência a antibióticos. Apenas as bactérias que contêm o marcador seletivo fundido com um gene que é transcricionalmente ativo no hospedeiro são capazes de sobreviver. Após um período de infeção adequado, as bactérias que expressam o marcador são isoladas do pulmão, fígado, baço e tecido mesentérico.