Overview

Este guia prático detalha as metodologias essenciais para o isolamento, a identificação e a quantificação dos vírus da gripe A, centrando-se especificamente na estirpe H1N1pdm09, utilizando sistemas de cultura de células MDCK. Fornece um fluxo de trabalho abrangente que inclui protocolos normalizados para a manutenção e subcultura de células MDCK, técnicas de propagação viral e confirmação molecular através de RT-PCR direcionada para o gene HA. Além disso, o texto oferece instruções aprofundadas sobre os métodos de quantificação viral, empregando ensaios de hemaglutinação (HA) para determinar os títulos virais totais e ensaios TCID50 utilizando o método Reed-Muench para calcular os títulos infecciosos. Combinando a base teórica com dados experimentais rigorosos e fluxogramas de procedimentos passo a passo, esta obra serve como um recurso vital para investigadores e profissionais de laboratório que estabelecem plataformas robustas para a caraterização do vírus da gripe e a descoberta de medicamentos antivirais.